工藝操作要點(diǎn)
菌種分離篩選流程：采樣→增殖培養(yǎng)→平板分離→初篩-復(fù)篩-發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（終篩）→菌種保藏
采樣采樣就是從自然界中采集含有目的菌的樣品。


研究菌種從蜂蜜原料中采集、篩選?？紤]到今后工業(yè)化生產(chǎn)主要原料為油菜花蜂蜜因此本研究從油菜花蜂蜜中直接采樣。
增殖培養(yǎng)無(wú)菌條件下取5mL油菜花蜂蜜接種到已配制好的蜂蜜培養(yǎng)基中，置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中15℃
150rmin培養(yǎng)30d培養(yǎng)過(guò)程定期觀察并記錄。
平板分離將經(jīng)增殖培養(yǎng)的樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋，涂布麥汁瓊脂平板，置于恒溫培養(yǎng)箱中25℃培養(yǎng)，定期觀察并記錄。
初篩挑取80株經(jīng)過(guò)二次平板分離的酵母菌株采用艾氏管法測(cè)定其發(fā)酵能力每株菌接種1管，保留發(fā)酵能力較高的菌株20株。
復(fù)篩將選取的20株酵母菌再次接種艾氏管每株3管，測(cè)試其發(fā)酵能力，保留4株發(fā)酵能力較高的菌株。
發(fā)酵試驗(yàn)：將復(fù)篩得到的4株酵母菌株接種于蜂蜜培養(yǎng)基28℃恒溫培養(yǎng)30d在發(fā)酵后期不斷對(duì)各個(gè)樣品進(jìn)行感官品評(píng)同時(shí)進(jìn)行部分理化指標(biāo)的檢測(cè)并不斷觀察記錄。從中篩選出性能良好、適宜大生產(chǎn)的菌株1-2株。菌種的保藏將篩選得到的菌株接種于麥汁斜面置28℃恒溫箱中培養(yǎng)24h置4C冰箱中保存。
菌種的鑒定：選取篩選得到的2株發(fā)酵能力較強(qiáng)的酵母菌參照《酵母菌的特征與鑒定手冊(cè)》進(jìn)行菌種鑒定1具體方法：
（1）細(xì)胞形態(tài)接種麥芽汁液體培養(yǎng)基28℃、150r/min培養(yǎng)24h制備水浸片顯微鏡檢觀察菌體形態(tài)。并通過(guò)電子顯微鏡觀察其菌體形態(tài)測(cè)定其細(xì)胞大小。
（2）菌落形態(tài)觀察將待測(cè)菌株在麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基上平板劃線28℃培養(yǎng)觀察菌群形態(tài)特征。
（3）糖類發(fā)酵測(cè)定將欲鑒定的菌株分別接種于酵母碳源發(fā)酵管中25℃-28℃培養(yǎng)每天觀察結(jié)果。一般觀察2d-3d即可凡不發(fā)酵者或弱發(fā)酵者，可延長(zhǎng)至觀察5d
（4）碳源同化試驗(yàn)菌液制備將待測(cè)菌株制成菌懸液
（1mL無(wú)菌生理鹽水接入約1接種環(huán)的新培養(yǎng)的酵母菌制成的菌懸液）
平板制備將此菌懸液全部倒入經(jīng)熔化并冷卻至45℃左右的同化碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中使菌體在培養(yǎng)基中混和均勻靜置凝固后在28℃把培養(yǎng)皿倒置幾小時(shí)，使表面不致太濕。點(diǎn)樣在培養(yǎng)皿底部做上碳源名稱的標(biāo)記分別用無(wú)菌不銹鋼匙或無(wú)菌藥匙按標(biāo)記加糖少許（約米粒大）如結(jié)果不明顯可于第2d再補(bǔ)加一次糖。
觀察觀察結(jié)果時(shí)以葡萄糖作對(duì)照，一般是25℃-28℃培養(yǎng)1d-2d觀察結(jié)果凡能同化者在所加碳源的周圍形成生長(zhǎng)圈。凡生長(zhǎng)緩慢的酵母或是在測(cè)半乳糖同化時(shí)，可適當(dāng)采用液體培養(yǎng)法，即在含某種碳源的液體培養(yǎng)基中接入酵母25℃-28℃培養(yǎng)1-2周以含葡萄糖的液體培養(yǎng)基作對(duì)照觀察酵母生長(zhǎng)情況是否更加渾濁或形成環(huán)、島等必要時(shí)可延長(zhǎng)至觀察3周。
（5）氨源同化試驗(yàn)培養(yǎng)基的制備是將酵母菌無(wú)氮合成培養(yǎng)基熔化取無(wú)菌試管4支加入已熔的培養(yǎng)基5mL然后向其中的2只加入硝酸鉀滅菌制成斜面。
接種、培養(yǎng)將4支斜面培養(yǎng)基中都接入供試菌（2支沒(méi)有氮源的斜面試管作對(duì)照）置于28℃恒溫培養(yǎng)觀察。能觀察到菌體生長(zhǎng)現(xiàn)象表明菌株可以同化該氮源。
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